重組豬源RNase抑制劑說明書
上海起發生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發生物自有品牌，打造優質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產業鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業，共同創世界優秀的中國生物制造企業，圓夢中國。
產品詳情
貨號 | 規格 | 價格 |
78BAB10003-100uL | 100uL(4KU) | ￥200.00 |
78BAB10003-1ml | 1ml (40KU) | ￥1600.00 |
78BAB10003-50ml | 50ml (2MU) | ￥50000.00 |
產品描述
本產品是以大腸桿菌中進行表達，并通過親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑，該蛋白特征與豬肝和人胎盤來源此類酶相似，可替代天然提取 RNase Inhibitor的應用。本產品與RNase A形成1： 1復合體，抑制RNase活性。該反應是可逆的，通過尿素及巰基類試劑能夠解離復合體，使RNase復性而抑制劑不可逆失活。本產品與其它競爭性抑制劑（核酸類，無機磷酸類）不同，可以很容易地通過苯酚處理將其從反應體系中除去，但不能抑制逆轉錄酶的RNase H的活性。使用時可直接加入含有RNA的反應液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉錄和體外翻譯等實驗。
產品特點
· cDNA合成
· 體外轉錄
· 體外翻譯
· 1-Step RT-qPCR
產品組分
緩沖液成分：20 mM HEPES-KOH(pH 7.6)，50mM KCl，8mM DTT，50% (v/v) glycerol。
使用方法
使用方法
溫馨提示：需要用無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預混液
1 cDNA合成
（1）在無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預混液
組分 | 反應體積（10ul） |
Oligo(dT)20 （或Random primer） （或基因特異引物） | 25pmoles (25pmoles) (5pmoles) |
10mM dNTPs | 2µL |
模板RNA | 2pg-5µg |
DNase/Rnase Free Water | 10ul |
（2）65℃加熱5min，立即置于冰上
組分 | 反應體積（10ul） |
RNA引物預混液 | 10ul |
5x RT Buffer | 4µL |
BIOHUB Reverse Transcritase | 1ul |
RNase inhibitor(40U/µL) | 1ul |
100mM DTT | 2ul |
DNase/Rnase Free Water | 補足20ul |
（3）輕輕混勻，按如下反應條件設置
逆轉錄反應條件 | ||
1 | 42℃ | 20-60min |
2 | 99℃ | 5min |
備注：逆轉錄溫度可在42-60℃之間調整，反應時間建議在20-60min內調整
（4）得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續PCR反應。
優化參考方法
優化參數 | 參考范圍 |
逆轉錄 | 50-60℃ 5-15min |
預變性溫度時間 | 95-98℃ 10sec-5min |
變性溫度 | 95-98℃ 3sec-10sec |
延伸/退火溫度 | 60-65℃ 5sec-30sec |
注意事項
1. 本產品在PH7?8時表現最佳抑制RNase活性。
2. 本產品發揮活性作用至少添加1 mM的DTT。
3. 本產品不抑制RNase H活性及逆轉錄酶活性。
運輸及保存方法
-20℃可保存12個月。
